λRed技术构建肺炎克雷伯氏菌sRNA-sgrS基因缺失突变株

摘要：

肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)以葡萄糖为底物进行发酵生产2,3-丁二醇(2,3-butanetriol,2,3-BD)的过程中,糖磷酸胁迫非编码小RNA(sugar-phosphate stress sRNA,sRNA-sgrS)通过调控菌体内葡萄糖浓度来解除菌体的应激效应.通过λRed同源重组技术,将构建的同源重组片段sgrSA1-EGFP-sgrSA2,经过酶切、纯化后,通过电转化将重组片段转入到含有pKD46质粒的野生型菌株K.pneumoniae HD79及突变型菌株K.pneumoniae HD79-02(△ldh,△ack)的感受态细胞中.经过荧光显微镜观察筛选阳性转化子,经过PCR验证K.pneumoniae HD79及K.pneumoniae HD79-02 sRNA-sgrS基因缺失重组菌株构建成功.利用λRed技术构建肺炎克雷伯氏菌sRNA-sgrS基因缺失突变株,可为后续探究菌体内外葡萄糖浓度对菌株产量2,3-BD的影响奠定了基础.

关键词：sRNA-sgrS基因、λRed同源重组技术、基因突变、肺炎克雷伯氏菌

所属期刊栏目：11

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金面上项目;黑龙江省教育厅重点项目

在线出版日期：2021-01-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：81-88