解淀粉芽孢杆菌中性蛋白酶基因的克隆与表达

摘要：

为了获得高效的中性蛋白酶基因，试验用PCR方法从解淀粉芽孢杆菌中扩增中性蛋白酶基因（npr），通过BamHⅠ、SalⅠ双酶切后，将该基因与表达载体PET-28a连接，同时转入到大肠杆菌BL21中表达，通过SDS-PAGE电泳技术对构建的工程菌的基因表达产物进行分析。获得特异 npr基因序列含1566 bp，编码522个氨基酸，含有完整的ORF，同源性达到100%。蛋白酶的分子量为57.4 kDa。IPTG能诱导中性蛋白酶基因在重组菌进行表达，通过改变IPTG诱导浓度、诱导温度及诱导时间等因素，得出在添加剂IPTG至终浓度为0.8 mmol·L-1，30℃诱导4 h为最佳诱导条件，获得最高酶活为450 U·mL-1。

关键词：解淀粉芽孢杆菌、中性蛋白酶、大肠杆菌、克隆、诱导表达

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：省农垦总局“十二五”重点科技开发项目农副产品精深加工及高效利用和贮运技术创新研究于示范HNK13KF-01-01。

在线出版日期：2015-03-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：51-54,59