定点突变阻止金黄色葡萄球菌α-溶血素溶血活性

摘要：

金黄色葡萄球菌分泌的α-溶血素是导致肺炎的重要致病因子.为进一步研究金黄色葡萄球菌α-溶血素(α-hla)的分子致病机理以及对其进行免疫预防,对α-hla第35位氨基酸进行了定点突变.用聚合酶链式反应(PCR)技术,从S.aureus wood46株基因组中扩增出α-hla基因,再利用重叠延伸PCR技术,将第35位带正电荷的组氨酸(密码子为CAC)突变为非极性的亮氨酸(密码子为CTC).hlaH35L基因测序结果显示第35位的组氨酸突变为亮氨酸,构建的重组表达质粒pET-28a-c(+)/hla和pET-28a-c (+)/hlaH35L在E.coli BL21 (DE3)中得到表达,重组蛋白α-Hla及hlaH35L大小均为33.4 kDa,α-Hla引起兔红细胞溶血,hlaH35L未引起兔红细胞溶血.成功表达并获得了失去溶血毒性的重组蛋白hlaH35L.

关键词：金黄色葡萄球菌、α-溶血素、定点诱变、原核表达、溶血活性

所属期刊栏目：26

分类号：S482(农药防治（化学防治）)

资助基金：国家自然基金委资助项目31072120;黑龙江省农垦总局资助项目HNK11A-08-01-04

在线出版日期：2014-06-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：44-49,112