DNA甲基化在双酚A调控巨噬细胞自噬中的作用

摘要：

目的 从DNA甲基化的角度,研究双酚A(BPA)对巨噬细胞自噬的影响.方法 以小鼠巨噬细胞(RAW264.7)为靶细胞,以 10 mg/L脂多糖(LPS)为激活剂,分别暴露于 10、100、200 μmol/L BPA溶液中,并设溶剂对照(0.1%DMSO)组;用qRT-PCR方法检测染毒 24h后细胞中自噬基因ATG6、LC3B、P62 以及甲基化转移酶DNMT1、DNMT3A、DNMT3B的mRNA表达水平,用溶酶体红色荧光探针检测染毒 12h后细胞溶酶体水平.以 10 mg/L LPS为激活剂,分别暴露于 100、100 μmol/L BPA+30 μmol/L EGCG(用EGCG预处理细胞 30 min后加入 100 μmol/L BPA)、30 μmol/L EGCG溶液暴露 4h,并设立溶剂对照(0.1%DMSO)组,用qRT-PCR方法检测细胞中自噬基因ATG6、LC3B、P62 mRNA表达水平.将处于对数生长期的RAW264.7 细胞运用单荧光GFP-LC3 腺病毒建立细胞转染模型,以 10 mg/L LPS为激活剂,分别暴露于 200 μmol/L BPA、200 μmol/L BPA+30 μmol/L EGCG溶液暴露 4、24 h,采用Cytation 5 细胞成像多模式检测系统检测染毒后细胞自噬水平.结果 与溶剂对照组相比,10 mg/L LPS组RAW264.7细胞P62 mRNA的表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05).与10 mg/L LPS组相比,100、200 μmol/L BPA染毒组RAW264.7细胞LC3B、P62mRNA的表达水平及200 μmol/L BPA染毒组ATG6 mRNA的表达水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05);且随着BPA染毒浓度的升高,RAW264.7 细胞LC3B、P62 mRNA的表达水平均呈升高趋势.与 10 mg/L LPS组比较,10 μmol/L BPA染毒组RAW264.7 细胞溶酶体水平升高,而 200 μmol/L BPA染毒组可使细胞溶酶体水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);且随着BPA染毒浓度的升高,RAW264.7 细胞溶酶体水平水平呈下降趋势.与 10 mg/L LPS组比较,10 μmol/L BPA染毒组RAW264.7 细胞DNMT1 mRNA的表达水平升高,DNMT3B mRNA的表达水平降低,100、200 μmol/L BPA染毒组RAW264.7 细胞DNMT1 mRNA的表达水平及 100 μmol/L BPA 染毒组 DNMT3A、DNMT3B mRNA 的表达水平均降低,而 200 μmol/L BPA 染毒组RAW264.7 细胞DNMT3A、DNMT3B mRNA的表达水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05).与溶剂对照组相比,10 mg/L LPS组RAW264.7 细胞ATG6 mRNA的表达水平升高,P62mRNA的表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);而LC3B mRNA的表达水平无明显改变.与 10 mg/L LPS组相比,100 μmol/L BPA染毒组RAW264.7 细胞LC3B mRNA的表达水平降低,ATG6 mRNA的表达水升高,30 μmol/L EGCG干预组P62 mRNA的表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);而ATG6 mRNA 的表达水平无明显改变.与 100 μmol/L BPA 染毒组相比,100 μmol/L BPA+30 μmol/L EGCG 联合组RAW264.7 细胞ATG6、P62 mRNA的表达水平升高,而LC3B mRNA的表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05).与 10 mg/L LPS组相比,200 μmol/L BPA染毒 4、24 h均能明显降低自噬小体数量;与 200 μmol/L BPA染毒组相比,200 μmol/L BPA+30 μmol/L EGCG联合组均能降低细胞中自噬小体数量.结论 在本实验条件下,BPA可抑制RAW264.7细胞中自噬小体和溶酶体数量,其作用机制可能与DNA甲基化转移酶的表达水平改变有关.

关键词：双酚A、DNA甲基化、自噬、巨噬细胞

所属期刊栏目：39

分类号：R994.6(毒物学（毒理学）)

资助基金：辽宁省百千万人才工程资助项目;沈阳医学院大学生科研课题;沈阳医学院硕士研究生科技创新基金

在线出版日期：2023-07-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：49-53