邻苯二甲酸单丁酯和邻苯二甲酸单乙基己酯联合染毒诱导小鼠睾丸间质细胞自噬与凋亡的关系研究

摘要：

目的 通过3-甲基腺嘌呤(3-MA)干预,探讨邻苯二甲酸单丁酯(mono-butyl phthalate,MBP)和邻苯二甲酸单乙基己酯(mono-ethylhexyl phthalate,MEHP)联合染毒诱导小鼠睾丸间质细胞(TM-3细胞)自噬与凋亡之间的关系.方法 取处于对数生长期TM-3细胞,设置MBP+MEHP(终浓度均分别为0、50、100、200、400、800 μmol/L)染毒组或者3-MA染毒组(终浓度分别为0、0.25、0.5、1、1.25、2.5、5 mmol/L);以及MBP+MEHP染毒组(终浓度均为400 μmol/L)、3-MA干预组[1 mmol/L 3-MA干预1h后,再加入MBP+MEHP(终浓度均为400 μmol/L)联合染毒液],培养24h,采用CCK-8法检测细胞存活率.采用MDC免疫荧光法检测细胞自噬囊泡的诱导情况;采用Annexin V-FITC/PI法检测细胞早期凋亡率;采用Western blot法检测细胞自噬相关蛋白LC3、p62表达水平和凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达水平.结果 与对照组相比,50 μmol/L的MBP+MEHP染毒组TM-3细胞的存活率升高,而100、200、400、800 μmol/L的MBP+MEHP染毒组TM-3细胞的存活率均下降,差异均有统计学意义(P＜0.05);且随着MBP+MEHP染毒剂量的增高,TM-3细胞的存活率呈先上升后下降的趋势.与对照组相比,0.25、0.5 mmol/L 3-MA染毒组TM-3细胞的存活率均较高,而1.25、2.5、5 mmol/L 3-MA染毒组TM-3细胞的存活率均较低,差异均有统计学意义(P＜0.05);;仅1 mmol/L 3-MA染毒组TM-3细胞的存活率.且随着3-MA染毒剂量的增高,TM-3细胞的存活率呈先上升后下降的趋势.TM-3细胞的存活率依次为对照组＞MBP+MEHP染毒组＞3-MA干预组,差异均有统计学意义(P＜0.05).免疫荧光结果显示,荧光信号强度依次为对照组＜3-MA干预组＜MBP+MEHP染毒组.TM-3细胞的早期凋亡率依次为对照组＜MBP+MEHP染毒组＜3-MA干预组,差异均有统计学意义(P＜0.05).自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达水平为对照组＜3-MA干预组＜MBP+MEHP染毒组,p62蛋白表达水平为对照组＞3-MA干预组＞MBP+MEHP染毒组;凋亡相关蛋白Bax表达水平为对照组＜MBP+MEHP染毒组＜3-MA干预组,Bcl-2表达情况为对照组＞MBP+MEHP染毒组＞3-MA干预组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 在本实验浓度下,MBP+MEHP染毒可提高TM-3细胞自噬和凋亡水平;3-MA抑制TM-3细胞自噬水平后,MBP+MEHP染毒提高细胞凋亡水平,说明自噬作为一种保护因素可抑制细胞凋亡.

关键词：邻苯二甲酸单丁酯;邻苯二甲酸单乙基己酯;小鼠睾丸间质细胞;自噬;细胞凋亡

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分类号：R994.6(毒物学（毒理学）)

资助基金：宁夏自然科学基金2018AAC03070

在线出版日期：2021-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：864-868,封2