钙离子在双酚A诱导巨噬细胞自噬中的作用

摘要：

目的 探讨钙离子在双酚A(bisphenol A,BPA)诱导小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)自噬中的作用.方法 将处于对数生长期的RAW264.7细胞,以5 mg/L脂多糖(LPS)为细胞激活剂,分别暴露于10、100、200μmol/LBPA溶液中,并设对照(0.1％ DMSO)组;采用RT-PCR法测定染毒4h后细胞中微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)mRNA的表达水平;采用Cytation 5细胞成像多模式检测系统监测4h后细胞内钙离子水平.将处于对数生长期的RAW264.7细胞,以10 mg/L脂多糖(LPS)为细胞激活剂,分别暴露于200 μmol/L BPA、1.25 mg/L自噬激活剂雷帕霉素(RAPA)+200μmol/L BPA、2.5 mg/L RAPA+200 μmol/L BPA溶液(RAPA预处理细胞30 min后加入BPA)中;采用Cytation 5细胞成像多模式检测系统动态监测6h后细胞内钙离子荧光强度变化和染毒4h后细胞内钙离子水平.将处于对数生长期的RAW264.7细胞运用单荧光GFP-LC3腺病毒建立细胞转染模型,以5 mg/L脂多糖(LPS)为细胞激活剂,分别暴露于100、200 μmol/L BPA、30 μmol/L Ver+ 100 μmol/L BPA、30 μmol/L Ver+200 μmol/L BPA溶液(Ver预处理细胞30 min后加入BPA)中培养30 h,并设对照(0.1％ DMSO)组;采用Cytation 5细胞成像多模式检测系统检测染毒后细胞自噬水平.结果 与5 mg/L LPS组相比,100、200 μmol/L BPA暴露组RAW264.7细胞LC3B mRNA的表达水平均升高,差异均有统计学意义(P＜0.05),且随着染毒浓度的升高,RAW264.7细胞LC3B mRNA的表达水平呈上升趋势.与5 mg/L LPS组相比,100、200μmol/L BPA暴露组RAW264.7细胞的钙离子水平均升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).与10 mg/L LPS组相比,200μmol/L BPA暴露4h后RAW264.7细胞的钙离子水平升高,差异有统计学意义(P＜0.05).与200 μmol/L BPA相比,2.5 mg/L RAPA+200 μmol/L BPA暴露4h后RAW264.7细胞的钙离子水平升高,差异有统计学意义(P＜O.05).对照组GFP-LC3腺病毒转染RAW264.7细胞中自噬小体数量＜5 mg/L LPS组＜100 μmol/L BPA暴露组＜200 μmol/L BPA暴露组.与相同浓度BPA暴露组相比,30 μmol/L Ver+100、200μmol/L BPA暴露组GFP-LC3腺病毒转染RAW264.7细胞中自噬小体数量均减少.结论 在本实验条件下,BPA可通过增加RAW264.7细胞钙离子水平,从而促进巨噬细胞自噬过程.

关键词：双酚A;巨噬细胞;钙离子;微管相关蛋白1轻链3B;自噬

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分类号：R994.6(毒物学（毒理学）)

资助基金：辽宁省"百千万人才工程"资助项目2019921079

在线出版日期：2021-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：859-863,封2