microRNA-96-5p对染氟成骨肉瘤细胞c-Jun氨基末端激酶通路的影响

摘要：

目的 探讨miR-96-5p对染氟大鼠成骨肉瘤(UMR-106)细胞c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)通路的影响.方法 将处于对数生长期的UMR-106细胞分别转染miR-96-5p反义寡核苷酸(anti-miRNA oligonucleotide,AMO)、过表达质粒以达到抑制和过表达作用,再以0(对照)、2 000 μmol/L NaF对细胞进行染毒,培养24 h后通过实时荧光定量PCR检测miR-96-5p及JNK通路上各因子基因的变化;培养48 h后,采用蛋白免疫印迹法检测JNK通路上各因子蛋白的变化.结果 与无氟对照组相比,氟染毒组UMR-106细胞miR-96-5p、天冬氨酸蛋白水解酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,caspase-3)mRNA表达水平升高(P＜0.05),cAMP直接活化交换蛋白(exchange protein directly activated by cAMP,Epac) mRNA表达水平下降,差异均有统计学意义(P＜0.05);转染miR-96-5p质粒后,与质粒对照组相比,质粒+NaF组UMR-106细胞miR-96-5p mRNA表达水平升高,差异有统计学意义(P＜0.05);转染AMO后,与AMO对照组相比,AMO+NaF组UMR-106细胞miR-96-5p mRNA表达水平升高,Epac和caspase-3 mRNA表达水平下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).与无氟对照组相比,氟染毒组UMR-106细胞腺苷酸环化酶6(Adenylate Cyclase 6,AC6)、Epac、p-JNK蛋白表达水平均下降,差异均有统计学意义(P＜0.05);与质粒对照组相比,质粒+NaF组UMR-106细胞AC6、Epac、天冬氨酸蛋白水解酶9(cysteinyl aspartate specific proteinase 9,caspase-9)蛋白表达水平均下降,而p-JNK、磷酸化Jun癌基因(Jun oncogene,c-Jun)、细胞色素C(cytochrome C,cyt C)和非活化caspase-3蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);转染AMO后,与AMO对照组相比,AMO+NaF组UMR-106细胞AC6、Epac、caspase-9、p-JNK蛋白表达均下降,p-c-Jun、cyt C和非活化caspase-3蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-96-5p可能促进染氟UMR-106细胞JNK通路磷酸化,从而介导细胞凋亡.

关键词：氟化钠、成骨肉瘤细胞、microRNA-96-5p、c-Jun氨基末端激酶通路

所属期刊栏目：35

分类号：R994.6(毒物学（毒理学）)

资助基金：国家自然科学基金81560515

在线出版日期：2019-06-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：857-862