小鼠β-catenin基因3'端非编码区荧光素酶报告载体的构建及其与miR-200a靶向调控关系的研究

摘要：

目的 构建小鼠β-catenin基因野生型及突变型重组荧光素酶报告质粒和小鼠miR-200a过表达质粒,验证miR-200a与β-catenin的靶向调控关系.方法 采用生物信息学方法预测miR-200a与β-c ate nin基因的结合位点.采用PCR法扩增小鼠β-catenin基因3'端非编码区(3'UTR)片段和pre-miR-200a基因片段,分别克隆至pGL3-control载体和p Le nti-CMV-EG FP载体,构建野生型及突变型重组荧光素酶报告质粒.293T细胞分为6组,分别将野生型与突变型荧光素酶质粒与miR-200a过表达质粒以及对照质粒共转染,检测6组细胞中荧光素酶的活力.结果 电泳和测序结果证实成功构建小鼠β-c ate nin基因野生型和突变型重组荧光素酶报告质粒以及miR-200a过表达质粒;双荧光素酶活力检测结果显示,野生型实验组相对荧光素酶活力均低于野生型对照组和阴性对照组,且差异有统计学意义(P＜0.05).结论 成功构建小鼠β-catenin基因野生型和突变型重组荧光素酶报告质粒以及miR-200a过表达质粒,miR-200a可以靶向抑制β-catenin的表达.

关键词：miR-200a、β-catenin、荧光素酶报告载体

所属期刊栏目：35

分类号：R994.6(毒物学（毒理学）)

资助基金：天津市自然科学基金15JCQNJC10500

在线出版日期：2018-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：299-302,封3