长链非编码RNA lnc-GCLC-1稳定沉默的肝细胞株L02的构建与验证

摘要：

目的 利用慢病毒载体构建长链非编码RNA lnc-GCLC-1沉默的稳转L02肝细胞株,为研究lnc-GCLC-1功能提供基础.方法 以lnc-GCLC-1为靶点,设计并合成4组双链发卡结构,分别与慢病毒载体psi-LVRH 1GP连接构成重组质粒;转化感受态细胞获取大量重组质粒后电泳、测序鉴定;通过瞬时转染筛选出2个有效的短发卡RNA(shRNA);将重组质粒转染293T细胞后,收集病毒液并感染L02细胞,经嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞株.利用荧光显微镜观察细胞绿色荧光情况以检测转染效果,采用Real-time PCR鉴定转染细胞株,并检测lnc-GCLC-1沉默对GCLC mRNA表达的影响.结果 电泳及测序结果表明重组慢病毒载体构建成功;shRNA-2和shRNA-4是有效的shRNA;用0.5 μg/ml嘌呤霉素成功筛选出稳定低表达L02细胞株;在shRNA-2和shRNA-4稳定转染L02细胞株中,lnc-GCLC-1的表达水平均低于阴性载体组(P＜0.05),沉默效率分别为21.3％和64.82％;shRNA-2组和shRNA-4组GCLC的mRNA表达量均低于阴性载体组(P＜0.01).结论 本研究成功构建了lnc-GCLC-1沉默稳转L02细胞株.

关键词：lnc-GCLC-1、沉默、L02细胞、慢病毒载体

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分类号：R994.6(毒物学（毒理学）)

资助基金：国家自然科学基金81660529,81360420;广西自然科学基金2015GXNSFAA139120

在线出版日期：2018-05-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1075-1079,封3