小鼠miR-29c过表达慢病毒载体的构建与鉴定

摘要：

目的 构建小鼠miR-29c过表达重组慢病毒载体,并对表达产物进行鉴定.方法 应用PCR法从小鼠MLE-12细胞中提取pre-miR-29c基因,测序后将其克隆到pLenti-CMV-EGFP慢病毒载体,通过PCR筛选及测序对阳性克隆进行鉴定.将miR-29c过表达慢病毒载体转染至293T细胞,进行慢病毒的包装和滴度测定.以RT-PCR检测慢病毒转染MLE-12细胞中miR-29c的表达量.结果 构建miR-29c慢病毒表达载体Lv-miR-29c经PCR和测序鉴定正确,并获得滴度为5.65× 108 IU/ml的病毒浓缩液,转染MLE-12细胞后miR-29c基因成功过表达.结论 成功构建miR-29c过表达慢病毒载体,为进一步研究miR-29c的功能奠定实验基础.

关键词：miR-29c、慢病毒、载体构建、MLE-12细胞、293T细胞

所属期刊栏目：34

分类号：R994.6(毒物学（毒理学）)

资助基金：中国博士后科学基金2014M560189;天津市自然科学基金15JCQNJC10500

在线出版日期：2018-05-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：965-968,封3