水中产气荚膜梭菌的荧光定量PCR检测法

摘要：

目的 研究水中产气荚膜梭菌的荧光定量PCR检测方法,缩短水中产气荚膜梭菌的检测时间.方法 根据产气荚膜梭菌的α-toxin基因设计引物并扩增,构建α-toxin-T重组质粒,对重组质粒进行梯度稀释后进行荧光定量PCR检测;用该方法检测水中常见的15种细菌,确定方法的特异性;检测产气荚膜梭菌加标水样,验证方法的可行性.结果 成功扩增出产气荚膜梭菌的α-toxin基因并连接T载体(417 bp).α-toxin-T重组质粒的稀释度在2.17×100～2.17×109 copies/μl的范围内,PCR反应的特异性良好,且重组质粒各浓度梯度间间隔的Ct值相近;所得回归方程为y=31.69-3.11x,r=0.997 73;该方法的检出限可达到为10 copies/μl.15株受试细菌DNA的检测结果均为阴性,产气荚膜梭菌加标水样检测结果阳性.结论 该方法操作快速,具有较好的特异性和灵敏性,适用于水中产气荚膜梭菌的快速检测.

关键词：产气荚膜梭菌、荧光定量PCR、α-毒素

所属期刊栏目：34

分类号：R123.1(环境卫生、环境医学)

资助基金：国家卫生和计划生育委员会公益性卫生行业科研专项 201302004

在线出版日期：2018-01-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：698-700