环境水体中痢疾志贺菌荧光定量PCR检测方法研究

摘要：

目的 对环境水体中痢疾志贺菌荧光定量PCR检测方法进行研究和评价.方法 根据痢疾志贺菌侵袭性质粒抗原H(invasion plasmid antigen H,ipaH)基因设计引物,利用普通PCR方法扩增其ipaH基因并将其与T载体进行连接以获得ipaH-T重组质粒;对重组质粒进行梯度稀释后进行荧光定量PCR,观察其标准曲线及最低检出限;提取17株可在环境水样中存在的多种致病菌DNA并以同样反应体系进行荧光定量PCR,验证该方法的特异性;将痢疾志贺菌加标于地表水水样中,测试该方法的环境样品检测能力.结果 成功扩增痢疾志贺菌ipaH基因并连接T载体;通过荧光定量PCR检测各梯度浓度重组质粒的Ct值间隔相近,检出限低至10 copies;17株致病菌DNA的检测结果均为阴性,显示该方特异性好;在环境地表水菌落总数为3.5× 103 CFU/ml、痢疾志贺菌加标浓度低至5 CFU/ml时,仍可以通过该方法检出,显示该方法的抗干扰能力强,可用于环境水样的直接检测.结论 通过荧光定量PCR方法可实现对水中痢疾志贺菌进行快速检测,检测时限3h以内,检测浓度5 CFU/ml,特异性及抗干扰性好,可用于污染水样的快速直接检测.

关键词：痢疾志贺菌、荧光定量PCR、细菌性痢疾、侵袭性质粒抗原H

所属期刊栏目：33

分类号：R117(卫生基础科学)

资助基金：国家卫生和计划生育委员会公益性卫生行业科研专项201302004

在线出版日期：2016-06-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：145-148