人偏肺病毒多表位抗原的构建与表达

摘要：

目的 构建含人偏肺病毒(hMPV)B细胞和T细胞表位的多表位抗原,并在原核系统表达,评价其免疫原性和免疫反应性.方法 以人偏肺病毒NL/1/00不同蛋白为模板,采用在线生物信息学软件Bepipred、ABCpred、Bcepred、LEPS及LBTOPE预测B细胞表位,以NetMHCpan及NetMHC预测CTL细胞表位,以NetMHCⅡ预测Th细胞表位.综合各软件预测结果,确定候选B细胞及T细胞表位,各表位间加入间隔序列“GPGPG”和“KK”,串联为多表位抗原基因mea,与pET32a(+)连接后转化E.coli BL21(DE3)宿主菌,经含氨苄的LB平板培养基筛选、鉴定获得重组pET32a(+)-mea,经IPTG诱导表达获得多表位抗原(MEA),以镍层析柱纯化,以Western blot鉴定表达蛋白,以MEA免疫小鼠,以ELISA法检测产生抗体效价,以间接免疫荧光法(IFA)检测抗体特异件.结果 共预测筛选人偏肺病毒B细胞表位6个,CTL表位4个,Th细胞表位2个,串联为多表位抗原基因mea,经与pET32a(+)重组后,转化E.coli BL21(DE3)宿主菌,经IPTG 30℃诱导5h,上清及沉淀均有目的蛋白表达.上清经镍层析柱纯化后获得重组多表位抗原MEA,浓度为1 mg/ml.Western blot检测显示,表达的MEA可与抗His抗体结合.经MEA免疫的BALB/c小鼠的抗血清经ELISA检测,抗体效价达105以上;经间接免疫荧光检测,抗血清能与感染vero-E6细胞的hMPV结合.结论 成功构建了hMPV多表位抗原基因,并在原核系统成功表达,获得多表位抗原MEA.该抗原具有很好的免疫原性和免疫反应性,并可与hMPV病毒发生结合,具有病毒特异性.

关键词：人偏肺病毒、B细胞表位、T细胞表位、多表位抗原

所属期刊栏目：32

分类号：R994.6(毒物学（毒理学）)

资助基金：中国博士后科学基金2013M541186;天津市自然科学基金15JCYBJC24700;天津市卫生计生委科技基金2013KY20

在线出版日期：2016-04-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：977-982,封3