基于慢病毒介导RNA干扰技术的人PARP-1基因沉默细胞株构建
目的 利用慢病毒介导的RNA干扰技术构建人淋巴母细胞TK6细胞的PARP-1基因沉默细胞株,为后续PARP-1基因功能和表观遗传学调控机制的研究提供有效的工具细胞.方法 利用瞬时转染方法筛选最佳干扰效果的shRNA片段,与慢病毒载体pLVX-shRNA1连接,形成重组质粒,DNA测序鉴定后进行病毒包装,转导TK6细胞,利用嘌呤霉素筛选得到稳定表达PARP-1 siRNA的PARP-1沉默细胞株,并用定量PCR和Western blotting鉴定所构建的细胞株.结果 转染shRNA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4细胞的PARP-1相对表达量分别为0.289、0.538、0.375和0.474,故选择shRNA1作为干扰PARP-1基因最佳片段.用0.5μg/ml的嘌呤霉素成功筛选出PARP-1沉默细胞株和空载体对照细胞株,并从mRNA、蛋白质、细胞表型来检测PARP-1基因的干扰效率,抑制效率超过80％.结论 成功构建PARP-1的siRNA慢病毒干扰载体,并筛选出PARP-1基因沉默的TK6细胞株,携带shRNA的慢病毒稳定、高效干扰PA RP-1基因表达.
聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1、RNA干扰、慢病毒、TK6细胞
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R994.6(毒物学（毒理学）)
2014-07-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
288-291,封3
