耐草甘膦基因G6原核表达蛋白条件的优化及其免疫反应性分析

摘要：

目的 在大肠杆菌中表达耐草甘膦基因G6,并对其进行免疫反应性分析.方法 将已构建好的携带G6基因的重组质粒pET28a-G6转化到大肠杆菌BL21中诱导表达,分别从诱导温度、异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)浓度及诱导时间进行了表达条件的探索.获得的重组蛋白在非变性条件下镍亲和层析纯化后,经质谱鉴定,对其免疫反应活性进行测定,分析该原核表达蛋白与转G6基因水稻中蛋白的等同性.结果 利用原核表达系统成功实现了G6重组蛋白的高效表达,其最适条件为:0.5 mmol/L IPTG、30℃和160 r/min摇床转速诱导7h.质谱鉴定为5-烯醇式丙酮酸-莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSPS).Western blot鉴定后,表达的重组蛋白与转G6基因水稻中的G6蛋白有相同的免疫反应性.结论 利用原核表达系统表达的G6重组蛋白可以替代植物外源蛋白进行转G6基因产品的食用安全性评价,也可用于转G6基因产品ELISA检测的抗体制备.

关键词：G6重组蛋白、原核表达、5-烯醇式丙酮酸-莽草酸-3-磷酸合成酶、等同性

所属期刊栏目：29

分类号：R117(卫生基础科学)

资助基金：国家“十一五”转基因重大专项2008ZX08011-005

在线出版日期：2012-12-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：678-681