水中活的非可培养状态痢疾志贺菌荧光定量PCR检测方法研究

摘要：

目的 建立活的非可培养(viable but nonculturable state,VBNC)状态痢疾志贺菌逆转录荧光定量PCR (reverse transcription quantitative PCR,RT-qPCR)检测方法.方法 低温寡营养诱导痢疾志贺菌进入VBNC状态,用平板计数法和荧光显微镜检法确定细菌的可培养数和活菌数,以痢疾志贺菌的志贺毒素基因stx( GenBank:M19437)、侵袭性毒力基因ipaH( GenBank:NC_007607)为目的基因设计引物,提取RNA进行RT-qPCR检测,研究检出限并建立标准曲线,用加标于环境水体中的志贺菌水样进行方法验证.结果 建立处于VBNC状态的痢疾志贺菌RT-qPCR检测技术,检测时间少于6h,复杂环境水体中每500μl水样可培养的痢疾志贺菌检出限为1～5 cfu,VBNC状态的痢疾志贺菌3～25 cfu.结论 该方法检测快速,可实现对VBNC状态志贺菌的检测,可用于复杂水样的直接检测,适用于水体污染调查和应急反应时快速筛查志贺菌.

关键词：痢疾志贺菌、活的非可培养状态、逆转录荧光定量PCR

所属期刊栏目：29

分类号：R117(卫生基础科学)

资助基金：中国疾病预防控制中心青年基金2010A203

在线出版日期：2012-11-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：590-592