化学致癌物诱导人胚肾上皮细胞转化模型的构建
目的 探讨DNA修复缺陷和癌基因高表达人胚肾上皮细胞转化模型在化学致癌物筛查中的应用价值.方法 利用siRNA技术构建DNA损伤修复基凶缺陷人胚肾上皮细胞(human embryonic kidney epithelial cell,HEK),采用微核实验检测DNA修复基因缺陷和H-ravv12癌基因高表达对DNA损伤修复功能的影响,并测定已知致癌物[硫酸镍(NiSO4)、N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)l和促癌剂佛波酯(TPA)诱导上述细胞的转化活性,比较两种类型的HEK细胞模型筛查化学致癌物的应用价值.结果 应用慢病毒介导的siRNA干扰技术成功构建了HEK-shERCCI、HEK-shERCC2、HEK-shATM和HEK-shMLH1等DNA损伤修复基因缺陷细胞株.与对照细胞HEK-shGFP相比,各DNA修复缺陷HEK细胞的生长速度、细胞形态和琼脂糖克隆的克隆形成率均没有差异,但HEK-shERCC2和HEK-shATM细胞对MMC(mitomycin C,MMC)所致遗传损伤的修复能力显著降低,1.0μg/ml MMC处理后,HEK-shERCC2和HEK-shATM细胞的微核率比对照细胞HEK-shGFP分别增加了34‰和30‰(P＜0.05).2 μmol/L MNNG、400μmol/L NiSO4和800 ng/ml TPA诱导HEKR细胞转化的时间分别是8周、8周和11周,但在染毒后20周均未能诱导各DNA损伤修复缺陷HEK细胞发生转化.结论 癌基因高表达转化模型用于化学物质致癌活性的筛查,其灵敏性高于DNA修复基因缺陷细胞转化模型.
DNA损伤修复基因、癌基因、人胚肾卜皮细胞、N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍、硫酸镍、佛波酯、细胞转化
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R994.6(毒物学（毒理学）)
国家自然科学基金重点项目3030055;国家杰出青年基金30925029;"863"计划重大专项2008AA02504
2010-11-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
399-403
