hPARP-1高表达HaCaT细胞株的建立

摘要：

目的 建立hPARP-1过表达的HaCaT细胞株,观察过表达该基因后所引起的生物学效应.方法 常规提取人皮肤角质细胞HaCaT的总RNA,RT-PCR扩增PARP-1全长cDNA基因片段,构建含PARP-1全长cDNA基因片段的真核表达载体pEGFP-PARP-1,通过Bgl Ⅱ、xho Ⅰ双酶切及测序鉴定其正确性.利用脂质体将pEGFP-N2和pEGFP-PARP-1分别转染人皮肤角质细胞HaCaT,通过G418加压筛选,建立稳定高表达hPARP-1的HaCaT-PARP-1细胞株,并采用Realtime Q-PCR和Western blotting检测其mRNA和蛋白的表达水平.结果 RT-PCR扩增产物经Bgl Ⅱ、xho Ⅰ双酶切后,与pEGFP-N2连接构建的重组体经酶切和测序,结果与Gene Bank报道序列一致.Real time Q-PCR及Western blotting结果显示,转染pEGFP-PARP-1质粒的细胞其PARP-1在mRNA及蛋白的表达水平均显著高于对照组.结论 PARP-1高表达细胞株成功建立.

关键词：基因、修复基因、hPARp-1、转染

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分类号：R994.6(毒物学（毒理学）)

资助基金：国家自然科学基金30972505;30700673;深圳市科技计划重点资助项目200901017

在线出版日期：2010-11-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：390-393,Ⅲ