细胞衰老过程中P16表观遗传学修饰研究

摘要：

目的 检测体外培养的人胚肺成纤维细胞复制性衰老过程及细胞早衰阶段中P16的表观遗传学调控作用.方法 在细胞复制性衰老过程(同步培养的22 PDL正常人胚肺成纤维细胞于约50%融合度时进行400μmol/L H2O2处理,每天用H2O2染毒工作液染毒1次,每次2 h,持续4 d)中,将正常人胚肺成纤维细胞分为年轻细胞组(22 PDL)、中年细胞组(35 PDL)、复制性衰老细胞组(49 PDL);将经400μmol,L H2O2染毒4 d的22 PDL人胚肺成纤维细胞继续培养7 d,设为早衰细胞组.荧光定量PCR检测P16的mRNA表达水平,甲基化特异PCR检测其肩动子区-846～-639 bp的甲基化水平,染色质免疫沉淀结合定量PCR检测其相应启动子区组蛋白修饰情况,包括组蛋白H3、H4乙酰化和H3(Lvs4)及H4(Lvs20)甲基化修饰.结果 与年轻细胞组相比,中年细胞组P16的mRNA表达降低,复制性衰老细胞组和早衰细胞组P16的mRNA表达升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).在P16启动子区,第一外显子上游-1 000 bp内,其CpG岛片段长度为995 bp,甲基化特异性PCR(MSP)扩增片段位于CpG岛内-84～-639 bp之间,长度为208 bp.中年细胞组、复制性衰老细胞组、早衰细胞组甲基化引物扩增产物的相对含量分别为0.42、0.34、0.47,未甲基化引物扩增产物的相对含量分别为0.61、0.96、0.79.在P16 IP1启动子区(-685～-489 bp),复制性衰老细胞组及早衰细胞组以组蛋白H4(Lys20)甲基化修饰为主;在P16 IP2启动子区(-229～-60bp),复制性衰老细胞组受组蛋白H3、H4乙酰化和H4(Lys20)甲基化联合修饰,早衰细胞组以H3、H4乙酰化修饰为主.结论 细胞衰老过程中,P16启动子区的组蛋白修饰联合调控其mRNA表达,复制性衰老与早衰的调控机制存在差异.

关键词：细胞衰老、基因、P16、甲基化、乙酰化

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分类号：R994.6(毒物学（毒理学）)

资助基金：国家自然科学基金重点资助项月30571592,30630055,30700673;广东省自然科学基金资助项日04002730;国家"973"计划基金资助项目2002CB512903;深圳市科技计划重点资助项目JH200505 300503A

在线出版日期：2009-02-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：941-945