环境样品中亚硝酸细菌amoA基因的克隆与测序

摘要：

对从环境样品中分离的亚硝酸细菌(Ammonia-oxidizing bacteria)amoA基因进行克隆与测序,为构建基因工程菌打下基础.采用亚硝酸细菌选择性培养基,从4个不同的畜牧养殖污水处理厂采集的样品(分别编号为1,2,3,4)在室温下富集培养2个月后,采取酚氯仿抽提的方法提取DNA.根据已报道的亚硝化单胞菌(Nitrosomonas sp.)amoA基因序列,设计引物AMOB/AMOE,并在AMOB,AMOE的5′-端分别加上了BamHⅠ和HindⅢ的限制性酶切位点,以利于进一步酶切和克隆.用AMOB/AMOE对4种样品的DNA进行PCR扩增,PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳分析.结果表明,4种样品中1号和3号样品扩增得到预期长度的DNA片段,2号和4号样品扩增没有得到预期片段.回收纯化PCR产物与pGEM-T载体连接,构建amoA基因测序载体,并转化E.coli M15.测序结果提交GenBank进行Blast分析.结果显示,扩增得到的DNA片段均与Nitrosomonas sp.GH22的amoA基因有99.7%的同源性,可从环境中分离的亚硝酸细菌中克隆出amoA基因.

关键词：亚硝酸细菌、amoA基因、克隆

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分类号：X172(环境生物学)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2001AA214191,2002AA601240;天津市科技攻关项目0231807111

在线出版日期：2004-04-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：77-80