活性污泥中的腐殖酸对实时荧光定量PCR的影响

摘要：

活性污泥基因组中的腐殖酸会影响实时荧光定量PCR检测的准确性.本研究采用抽提基因组前腐殖酸去除试剂盒、抽提基因组后腐殖酸去除试剂盒、抽提基因组前后共同去除试剂盒3种不同的方法,去除活性污泥基因组中的腐殖酸,经过PCR和实时荧光定量PCR方法的验证找出腐殖酸去除的最适方法;通过DNA酶Ⅰ消化基因组DNA保留杂质腐殖酸,向其中掺人已知浓度的总细菌质粒,5个浓度10倍梯度稀释10 ng· μL-1的定量模板,探究腐殖酸和梯度稀释模板对活性污泥总细菌实时荧光定量PCR的影响.结果显示,在不同处理组中,通过反复洗脱的方式在基因组抽提前去除活性污泥中的腐殖酸,DNA的得率(162.46 ng· μL-1)最多,A260/230值为1.34,A260/280值为1.80,腐殖酸的残留最少;去除腐殖酸后外加内标质粒组,梯度稀释10 ng· μL-1模板100倍及以上,腐殖酸的抑制效应显著降低后保持不变(P＜0.05),100倍以内变化不显著(p＞0.05);抽提前去除腐殖酸组进行实时荧光定量PCR的抑制效率为6.16％,显著低于对照组的72.68％ (p＜ 0.05).研究表明,抽提前去除活性污泥腐殖酸,抽提后将基因组模板稀释100倍可显著降低活性污泥实时荧光定量PCR的抑制效率,提高定量结果的准确性.

关键词：腐殖酸、稀释模板、活性污泥、实时荧光定量PCR、抑制效率

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分类号：Q89;X703.1(环境生物学)

资助基金：国家自然科学基金51778390;江苏省自然科学基金BK20171219;江苏省自然科学研究重大项目14KJA610001;国家重点研发计划项目No.2016YFC0401108Supported by the National Natural Science Foundation of China51778390;the Natural Science Foundation of Jiangsu ProvinceBK20171219;the Major Program of Natural Science Foundation of Jiangsu Province14KJA610001;the National Key R&D Program of China2016YFC0401108

在线出版日期：2018-02-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：201-207