pUCD-recA重组发光菌构建及对遗传毒性污染物响应作用

摘要：

基因重组发光菌在水质毒性的评价中具有重要的作用,本研究从分析污染物毒性损伤的机制出发,构建新型pUCD-recA基因重组发光菌. 用PCR法从大肠杆菌W3110中扩增recA基因,将其与pGEM-T easy载体连接后测序.测序正确的recA片段及pUCD615载体均用BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切,连接后电转化导入宿主菌JM109.挑取克隆,提取质粒用PCR鉴定,阳性克隆再进行测序.将构建成功的pUCD-recA载体转化入大肠杆菌RFM443,加入相应的遗传毒性污染物,观察发光响应作用.结果表明,recA基因PCR扩增出的片段为293 bp,测序结果与GenBank中的recA序列进行BLAST比对,同源性为99%,表明扩增序列正确.与pUCD615载体连接后的测序结果表明,recA基因已正确地插入到pUCD615的多克隆位点,方向和读码框正确,重组发光菌载体构建成功.将构建好的重组载体转化入RFM443宿主菌,加入遗传毒性污染物观察响应效果.丝裂霉素C(MMC)对pUCD-recA重组发光菌诱导效果最好,0.01 mg/L即可有很好的响应曲线;N′-甲基-N′-硝基亚硝基胍(MNNG)则在50～100 mg/L时可发挥最佳响应作用.

关键词：重组发光菌、遗传毒性、pUCD-recA载体、响应效应

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分类号：X171.5(环境生物学)

资助基金：国家科技支撑计划重点项目2006BAC19B06;浙江省重大科技专项社会发展项目2007C13010;浙江省嘉兴市项目2006AY2059

在线出版日期：2009-09-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1722-1726