石油烃厌氧降解关键基因masD和bamA的实时荧光定量PCR检测方法与应用

摘要：

masD和bamA是控制石油烃厌氧降解的关键基因,利用实时荧光定量PCR技术检测masD和bamA 基因具有简便快速和易操作等优点.但目前所用方法存在扩增效率低,方法灵敏度较差的问题.本文根据引物设计原则,利用Allele ID6软件重新设计了扩增masD和bamA的实时荧光定量PCR引物,将质粒DNA进行8次10倍梯度稀释后构建实时荧光定量PCR标准曲线.优化后的体系(20μL)为:FastStart Essential DNA Green Master 10.0μL,上下游引物各 0.4μL,RNase-Free Water 4.2 pL,5.0 μL DNA模板.利用新设计的引物扩增masD和bamA基因的最适退火温度分别为61℃和57℃.优化后的检测方法扩增效率提高至97.5％和71.2％,比文献报道的方法提高了 7.6％一44.5％,具有更高的重复性和灵敏度.利用设计的引物对陕北5个地区石油污染土壤中的masD和bamA基因进行定量检测结果表明,石油污染土壤中普遍存在着控制石油烃厌氧降解的关键基因,所测定的土壤中bamA降解基因的拷贝数远高于masD降解基因.

关键词：实时荧光定量聚合酶链式反应、厌氧降解基因、引物设计、masD基因、bamA基因、扩增效率、石油污染土壤

所属期刊栏目：42

分类号：S852.65;R372;S41-32

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金

在线出版日期：2023-04-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：176-184