人端粒酶催化亚单位(hTERT)反义分子探针的制备与理化性质初步研究
制备放射性核素99Tcm标记的针对人端粒酶催化亚单位(human telomerase reverse transcriptase, hTERT)mRNA的反义分子探针,探讨其在体外的稳定性和相关理化性质.针对hTERT mRNA(GENBANK号为AF015950)的第2331～2348位核苷酸(含18个碱基),即5′-TCAAGAGCCACGTCTCTA-3′(hTERT SON),设计反义寡核苷酸序列(hTERT ASON)为5′-TAGAGACGTGGCTCTTGA-3′;对hTERT ASON进行适当修饰.通过双功能螯合剂S-Acetyl NHS-MAG3进行放射性核素99Tcm标记.针对影响标记的主要因素(SnCl2用量、反应体积、反应时间等)进行条件摸索,建立最优化标记方案.纸层析法测定反义分子探针(99Tcm-hTERT ASON)的标记率和放射化学纯度,计算比活度.检测99Tcm-hTERT ASON的放射稳定性与序列稳定性,以及血清蛋白结合率.所有结果通过统计学软件SPSS12.0进行分析.室温下反应15～30min后,99Tcm-hTERT ASON的标记率为76%±5%(n=5);在相同条件下,无双功能螯合剂作用,ASON的标记率仅为5.0%±1.6%(n=5);二者比较有显著差异(P<0.05).99Tcm-hTERT ASON放射化学纯度达到96%以上,比活度为1850GBq/g.在不同条件下,99Tcm-hTERT ASON的放射化学纯度在24h内均达到93%以上.PAGE凝胶电泳显示99Tcm-hTERT ASON在与人新鲜血清37℃孵育6h内未发生任何降解.与人新鲜血清37 ℃孵育1、3和6h后,99Tcm-hTERT ASON的血清蛋白结合率分别为15.0%±1.6%、18.0%±1.9%和20.0%±2.4%.99Tcm-hTERT ASON具有较高标记率、放射化学纯度和比活度;其放射稳定性和序列稳定性均良好,与血清蛋白结合率较低,适合作为反义显像剂用于进一步研究.
人端粒酶催化亚单位(hTERT)、S-Acetyl、NHS-MAG3、99Tcm、分子探针、反义显像
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R817(放射医学)
高等学校博士学科点专项科研基金资助项目20050001108;教育部教育振兴行动计划特殊专项"九八五"工程:Ⅱ期资助项目985-2-056;国家自然科学基金资助项目30670583,30470498,30900374;国家重点基础研究发展计划"973"计划资助项目2006CB705705;高等学校博士学科点专项科研基金新教师基金课题200800011061
2010-06-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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