定点突变提高菜豆环氧水解酶的对映选择性

摘要：

为了提高菜豆环氧水解酶( PvEH1)催化对氯环氧苯乙烷( pCSO)的对映选择性,利用定点突变构建了PvEH1W102L、PvEH1P137K及PvEH1I151V三种突变体,分别研究了突变体全细胞动力学拆分rac-pCSO的催化特性,优化了PvEH1W102L动力学拆分rac-pCSO的初始底物浓度及反应时间,通过分子模拟分析了PvEH1W102L对映选择性提高的机理.结果表明,最优突变体PvEH1W102L的E值为25.5,相对酶活为212.6%,分别是PvEH1的11.6倍与2.1倍;PvEH1W102L动力学拆分150 mmol·L?1rac-pCSO,反应4 h后,可获得(R)-pCSO(产率为45.62%,ees为96.30%)和(R)-对氯苯基乙二醇(产率为50.91%,eep为90.26%).分子模拟结果分析表明,PvEH1的102位色氨酸(W)突变为亮氨酸(L)降低了酶与(R)-pCSO的结合能力,从而提高了PvEH1W102L对pCSO的对映选择性.

关键词：生物催化、定点突变、环氧水解酶、对氯环氧苯乙烷、对氯苯基乙二醇、分子模拟

所属期刊栏目：69

分类号：Q814.9(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学21676117;2017年江苏省研究生实践创新计划项目SJCX17_0467

在线出版日期：2018-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：4335-4341