重组卤醇脱卤酶的表达优化及纯化

摘要：

卤醇脱卤酶可以催化合成具有光学纯的环氧化物及β-取代醇等一类高价值手性药物中间体.卤醇脱卤酶的高效重组表达及纯化可以更好地促进该酶的应用.通过PCR扩增,将编码卤醇脱卤酶的基因克隆至pBAD表达载体叶,经测序鉴定后,将其转入大肠杆菌TOP10中,对其重组表达条件进行优化,以提高蛋白表达量.同时,对该酶在已构建好的T7表达体系中的表达条件也进行了优化.经酶活测定及SDS-PAGE分析,选择最优条件进行500 ml摇瓶的表达,在两种表达体系中,可溶性目的蛋白的含量均大大提高,占总蛋白含量35%左右.采用Q-Sepharose阴离子交换层析技术一步纯化,分别获得纯度为90%的卤醇脱卤酶34 mg和41 mg.同时,pBADHheC表达体系的构建为卤醇脱卤酶的生物催化特性改造奠定了基础.

关键词：卤醇脱卤酶、高效表达、T7表达体系、pBAD载体、纯化

所属期刊栏目：61

分类号：Q814.1(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金项目20872014;教育部出国留学人员启动资金

在线出版日期：2011-05-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：3213-3219