ChBD和SUMO双功能融合肝素酶I的设计与表达

摘要：

利用ChBD和 SUMO 标签构建4种不同的融合蛋白体系,分别为 ChBD-Hep I、ChBD-SUMO-Hep I、SUMO-ChBD-Hep I和ChBD-Hep I-SUMO。经过发酵工艺优化实验,确定该4种酶在最优条件下的摇瓶发酵酶活分别为2.44IU/mL、6.92IU/mL、6.01IU/mL和4.51 IU/mL。同时,通过酶学性质研究,确定该4种重组酶的最适反应温度与 pH 分别为30℃和7.0,表明SUMO 和ChBD标签不影响 Hep I的催化反应。4种重组酶的热稳定性较天然 Hep I明显提高,其中ChBD-SUMO-Hep I在30℃半衰期达50 min,由此,确定其为最优菌株。将ChBD-SUMO-Hep I进行5 L发酵罐扩大培养,酶活达到26 IU/mL,是摇瓶培养的5倍,表明其具有工业化生产的潜质。

关键词：肝素酶I、酶活、ChBD标签、低分子量肝素

所属期刊栏目：35

分类号：TQ464

资助基金：国家自然科学基金项目21604033。

在线出版日期：2017-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：315-318