10.16085/j.issn.1000-6613.2016.s2.054
表达IFNα2b-HSA融合蛋白的CHO细胞培养基优化及发酵放大
毕赤酵母表达的干扰素与白蛋白融合蛋白虽然避开了干扰素单体半衰期短的缺陷,但毕赤酵母对药物的糖基化修饰与人体的糖基化修饰差异性导致了药物的毒副作用。目前药物在 CHO 系统的表达得到了广泛应用。本研究室首次构建了能表达干扰素α2b和人血清白蛋白融合蛋白(IFNα2b-HSA)的CHO 细胞株。在此基础上,本研究通过对12种国产商业化基础无血清培养基和5种流加培养基进行优化筛选,获得最适培养方案:基础培养基选择最适于生长的5号培养基(M2∶M4=1∶1),流加培养基选择最有适于表达的 F4培养基。在此基础上,进行5L生物反应器的发酵放大,pH 为6.9~7.4,DO 为40%~60%,细胞密度达到7.0×106 cells/mL时,温度由37℃降温至34℃,细胞活率降至80%时停止发酵,最终融合蛋白表达量达到137mg/L。初步实现了IFNα2b-HSA融合蛋白在CHO 细胞中的高密度发酵。
干扰素α2b、白蛋白、CHO细胞
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TQ464
国家重大新药创制项目2013ZX09102033;国家高技术研究发展863计划2014AA021003和2015AA020802;国家自然科学基金81273437项目。
2017-01-08(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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