致病蛋白Htt-exon1在大肠杆菌中表达及铜离子结合能力的检测

摘要：

含有过度延长的氨基末端谷氨酰胺重复序列(polyglutamine,polyQ)的Htt-exon1具有神经毒性,导致亨廷顿舞蹈症(Huntington's disease,HD),研究表明HD病人脑内有过度积累的铜离子,但机制不明.为了探索铜离子与Htt-exon1的关系,文章利用基因工程技术,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增出含有10个polyQ的Htt-exon1 polyQ10和含有42个polyQ的毒性蛋白Htt-exon1 polyQ42,克隆至pGEX-6p-2原核表达载体上,在大肠杆菌BL21中表达,异丙基-β-D-硫代半乳糖(IPTG)诱导表达出融合蛋白GST-Htt-exon1并分离纯化出Htt-exon1 polyQ10和Htt-exon1 polyQ42,样品硝化后用电感耦合等离子体质谱(inductively coupled plasma masss pectrometry,ICP-MS)检测Htt-exon1结合铜离子的量.结果 表明:分离纯化后的GST-Htt-exon1 polyQ10分子量为40 kDa左右,GST-Htt-exon1 polyQ42分子量为50 kDa左右,经PP酶切割掉GST标签后,通过Western Blot进一步验证,纯化后的Htt-exon1 polyQ10分子量为8.5 kDa,Htt-exon1 polyQ42分子量为12.5 kDa,与预期一致;并利用ICP-MS检测发现,Htt-exon1 polyQ10和Htt-exon1 polyQ42均具有结合铜离子的能力.

关键词：亨廷顿蛋白;大肠杆菌;原核表达;分离纯化;铜离子结合能力

所属期刊栏目：45

分类号：Q789(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金31671284

在线出版日期：2022-02-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：119-124