蜡梅AFLP反应体系优化及引物筛选

摘要：

通过对影响AFLP反应体系主要因素的优化,建立了蜡梅的AFLP反应体系,并筛选出了适宜该体系分析的引物.结果表明,20 μL蜡梅AFLP最佳酶切体系为模板600 ng DNA,3 U Pst Ⅰ和3 UMse Ⅰ,在37℃下双酶切2h;在20 μL最佳连接体系中酶切产物为15 μL,3 U T4连接酶,0.25 μmol·L-1 Pst Ⅰ接头,2.5 μmol·L-1 MseⅠ接头,1 μL 10×T4 Buffer,在22℃下连接10 h；在20 μL最佳预扩反应体系中稀释10倍的连接产5 μL,2.0mmol·L-1 Mg2+,2 U Taq酶,300 μmol·L-1 dNTP,0.5μmol·L-1 Pst Ⅰ和Mse Ⅰ引物(P+AGA/M+ ATC)；在20 μL最佳选择性扩增反应体系中5 μL稀释20倍的预扩增产物,2.0 mmol· L-1的Mg2,2UTaq酶,300μmol·L-1dNTP,0.5 μmol·L-1 Pst Ⅰ和Mse Ⅰ引物(P+ AGA/M+ ATC).最后,利用上面的体系筛选出了96对适宜于蜡梅AFLP分析的引物.

关键词：蜡梅、AFLP、体系优化、引物筛选

所属期刊栏目：45

分类号：S685.99(观赏园艺（花卉和观赏树木）)

资助基金：林业公益性行业科研专项200904009

在线出版日期：2012-03-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：523-529