兔脑组织因子基因在大肠杆菌中的克隆与表达

摘要：

重组组织因子(recombinant tissue factor,rTF)是新一代凝血酶原时间检测(PT)试剂的主要成分.从新鲜兔脑组织提取总RNA,通过RT-PCR得到TF全长编码基因,并克隆到pMD19-T载体.以测序验证正确的重组子为模板,扩增TF基因并构建成融合表达质粒pMAL-c2X-TF,并将其转化到DH5α中.SDS-PAGE和Western blotting证明,菌体诱导后形成可溶性的融合表达产物,该融合蛋白通过亲和层析纯化和凝血因子X a水解成为游离的TF蛋白,该蛋白通过脂化,制备成重组PT试剂.凝血试验表明,该试剂对血浆有明显的促凝活性.

关键词：兔脑、组织因子、大肠杆菌、基因克隆、基因表达

所属期刊栏目：27

分类号：Q344+.13(遗传学分支学科)

在线出版日期：2007-04-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：83-87