建立利用萤光素酶快速检测细胞活性的方法

摘要：

运用PCR的方法,从萤火虫萤光素酶基因载体pGL4.26扩增萤火虫萤光素酶基因片段,将其插入连接于原核表达载体pET24a中,构建重组表达载体pET24a-Luc.经酶切鉴定及序列分析后,将重组载体转化到表达菌株大肠杆菌BL21( DE3)中,获得阳性重组菌BL21/pET24a-Luc.IPTG诱导蛋白高效表达并通过镍柱亲和层析纯化萤火虫萤光素酶.该目的蛋白活性用Bright-GloTM试剂进行验证并用于建立一种基于测量ATP含量的检测细胞生物活性的方法.与传统的细胞生物活性检测试剂盒MTT,CCK-8以及Alamar Blue比较,该方法具有反应迅速、活力高、灵敏度好、生产方便的优点,具有实际应用的潜力.

关键词：萤火虫萤光素酶、蛋白表达、蛋白纯化、细胞活性

分类号：Q814.9(生物工程学(生物技术))

资助基金：上海市浦江人才计划08PJ1404100

在线出版日期：2013-06-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：45-53,84