α-N-乙酰半乳糖胺酶的表达及活性检测

摘要：

为了建立新型α-N-乙酰半乳糖胺酶的筛选、检测方法,实验中提取脑膜金黄杆菌的基因组DNA,以此为模板PCR扩增出α-N-乙酰半乳糖胺酶(A4).将A4克隆至pET-24a载体,转化B121表达菌株进行蛋白表达,使用亲和层析方法纯化His-A4酶,选择显色底物验证酶活性,同时,改进了传统的ELISA方法,直接将红细胞膜包被于ELISA检测平板中,以红细胞膜表面抗原作为直接底物,用ELISA方法检测酶活性.此研究建立了新型ELISA实验方法,以此方法验证了A4酶的活性,证明了此酶能够有效降低红细胞表面抗原抗体反应,且具有浓度和时间依赖性.

关键词：α-N-乙酰半乳糖胺酶、重组蛋白、蛋白纯化、ELISA方法

分类号：Q55(酶)

资助基金：教育部重点项目V200704

在线出版日期：2013-06-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：67-74