毕赤酵母表达人胰岛素前体的纯化和N末端不均一性分析

摘要：

利用毕赤酵母生产人胰岛素前体时,在胰岛素前体的N末端引入一段由10个氨基酸组成的间隔肽(EEAEAEAEPK)虽然可以提高目的产物的表达量,但间隔肽中的多个酶切位点有可能造成目的产物N末端的不均一性.对毕赤酵母分泌表达的胰岛素前体蛋白进行分离纯化,得到的样品经过MALDI-TOF-MS和N末端测序,证实了胰岛素前体N末端不均一性的现象,并对产生不均一性的原因进行了分析.实验同时证实,利用毕赤酵母得到的胰岛素前体,经胰蛋白酶酶切后,生成了B链缺少第30位苏氨酸但N末端均一的胰岛素产物desB30,且C末端未发生降解,这为人胰岛素和地特胰岛素的制备提供了新思路.

关键词：毕赤酵母、胰岛素前体、反相层析、MALDI-TOF-MS、N末端测序

所属期刊栏目：39

分类号：Q815(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家科技重大专项2011ZX09202 301-05

在线出版日期：2016-05-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：565-571