重组谷胱甘肽-S-转移酶-肝素酶Ⅰ在大肠杆菌中的表达、纯化及其性质

摘要：

肝素酶Ⅰ（HeparinaseⅠ,HepⅠ）是一种多糖裂解酶,可特异性裂解硫酸肝素分子中糖苷键以制备低分子质量肝素（LMWH）。由于重组肝素酶Ⅰ在大肠杆菌中表达时极易形成包涵体,将肝素酶Ⅰ基因的N端融合谷胱甘肽-S-转移酶（GST）标签,在大肠杆菌中进行低温表达。结果显示,约90%的GST-HepⅠ融合蛋白以可溶性形式表达,表达的目标蛋白粗酶经过一步亲和纯化,比活为124.7 U/mg,纯化倍数达到366.7倍,酶活回收率为31.0%;结果表明Ca2＋对重组GST-HepⅠ有很强的激活作用,GPC-HPLC结果显示重组GST-HepⅠ与天然肝素酶Ⅰ裂解图谱相同。

关键词：肝素黄杆菌、谷胱甘肽-S-转移酶、肝素酶Ⅰ、融合表达、亲和纯化

所属期刊栏目：37

分类号：Q814.1(生物工程学(生物技术))

资助基金：上海市重点学科建设项目B505

在线出版日期：2012-04-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：458-463