安宫牛黄丸对大鼠自发性脑出血模型血肿周围脑组织氨基酸表达及超微结构的影响研究

摘要：

目的:自发性脑内出血发病率高,现代医学不论是外科治疗还是内科治疗效果均不理想.由于血肿形成后的原发性组织损害已无法恢复,继发性的脑损害预防才是治疗的关键.近期对继发性脑损害的研究重点集中在:血肿周围脑组织血流及代谢改变及其调控因素,继发性脑水肿的发生机制,早期血肿扩大的原理和预防,铁离子超载理论的临床证实及治疗,兴奋性氨基酸理论等方面,并取得了很大的进展.但关于脑保护的实验室工作和临床实践不多,应用于临床的成熟技术、方法更少.安宫牛黄丸主治"瘟毒热盛,神昏谵语,狂躁不安,痰浊内闭痉厥抽动,不省人事",所以具有清热解毒、豁痰开窍的功效,主治热病,邪入心包、高热惊厥、神昏谵语;安宫牛黄丸针对病人高烧、神志昏迷、烦躁而乱语及惊厥抽搐等症,属中医临床治疗急症之要药.广泛应用于临床治疗脑血管疾病,但机制不详,本文对大鼠脑出血模型氨基酸变化和超微结构的改变加以研究.方法:成年雄性SD大鼠75只,正常对照组(SD)5只,假手术组(NO)10只,模型组(N)20只,全方组 (A)20只,简方组(a)20只;除正常对照组外,试验大鼠均以北京同仁堂制药厂提供的安宫牛黄丸粉剂预处理;安宫牛黄丸分全方和简方两种,简方缺少朱砂和雄黄;灌胃一周,每日一次,最后一次灌胃后两小时造模;造模采用尾动脉切开取血法,用微量注射器在立体定向仪下缓慢(5min)注入右侧内囊(中线旁3mm,前囟前0.5mm,深5mm) 100μl自体非抗凝血,留针10min,制成ICH大鼠模型.造模成功后4h、24h处死取脑,采用不同方法检测血肿边缘脑组织损害性改变.①氨基酸测定:冰盒上操作,取血肿周边1mm脑组织100mg(必须＞80mg,无血,位置一致,快速),电子天平精确称重,分别放入离心管中,标记后迅速置液氮罐中快速冷冻,后置-70℃冰箱保存,成批检测.采用高效液相色谱分析法(high performance liquid chromatograph,HPLC)检测不同实验组动物血肿周边脑组织兴奋性氨基酸( excit atoryamino acids, EAA) 谷氨酸( glutamic acid, Glu) 和天冬氨酸( aspartic acid, Asp)以及抑制性氨基酸甘氨酸(glycine acid, Gly)、λ-氨基丁酸(λ-aminobutyric acid, GABA)、谷氨酰胺(Glutamine,Gln)的变化规律.②电镜观察:取血肿周围脑组织,切分为1mm3置于盛有4%多聚甲醛-2.5%戊二醛固定液中固定2h;PBS液冲洗3次,每次10min,环氧树脂包埋,超薄切片铅铀染色.切片片厚50nm,组织经锇化,梯度酒精脱水,Epon812包埋,LKB超薄切片,经醋酸铀-枸橼酸铅双重染色,EM208s型透射电镜观察照相.观察神经细胞及细胞器形态、血管形态、髓鞘改变等超微结构.按相同放大倍数摄片.结果:氨基酸变化:①与对照组相比,模型组4h及24h标本内兴奋性氨基酸Glu、Asp以及抑制性氨基酸GABA增高有显著性意义,且差异十分显著;抑制性氨基酸Gln在假手术组增高有显著性意义(P＜0.01);Gly变化不明显.②在4h标本中,与模型组相比,全方祖内兴奋性氨基酸Glu、Asp下降有显著性意义(P＜0.01);GABA、Gly变化不明显.简方组兴奋性氨基酸及抑制性氨基酸均变化不显著.③在24h标本中,与模型组相比,全方祖内兴奋性氨基酸Glu、Asp下降有显著性意义,抑制性氨基酸Gln增高有显著性意义(P＜0.01);GABA、Gly变化不明显.简方组仅兴奋性氨基酸Glu下降有显著性意义(P＜0.01).超微结构变化:在双盲状态下,分组观察,半薄切片观察组织病理形态,超薄切片观察细胞器、血脑屏障、神经纤维丝的变化.①模型组造模后4h即已出现较假手术组明显的神经细胞、血管损伤性变化.②假手术组、模型组、简方组造模后4h、24h均出现严重血管损伤,致管腔变形狭窄.③全方组在造模后4h、24h均表现为神经元、胶质细胞核膜完整清晰,无水肿,细胞器结构正常;血管周边轻度水肿,可见部分内皮细胞核增大.④全组标本神经纤维未见明显损伤.结论:①安宫牛黄丸全方可能通过影响兴奋性氨基酸的表达实现脑组织继发性损害的保护作用.②安宫牛黄丸全方干预的大鼠自发性脑出血后脑损害轻微.③安宫牛黄丸简方效果不明显.

关键词：安宫牛黄丸、自发性脑出血、氨基酸

所属期刊栏目：13

分类号：R743.34(神经病学与精神病学)

在线出版日期：2007-05-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共2页

页码：224-225