小麦TaSnRK2.1蛋白的原核表达及抗体制备

摘要：

为深入研究小麦TaSnRK2.1在小麦-叶锈菌互作过程中的功能,PCR扩增TaSnRK2.1的开放阅读框(ORF)全长,对其进行生物信息学分析.结果 表明,该基因开放阅读框全长为1 029 bp,编码342个氨基酸,相对分子质量38.78 kDa,等电点为5.78.构建重组原核表达载体pColdⅡ-TaSnRK2.1,并转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3).使用终浓度0.5 mmol/L IPTG诱导基因表达,并进行电泳检测.结果 显示,诱导蛋白(包涵体)在约39 kDa处有明显条带,与预测蛋白分子量大小一致.利用Ni-NTA亲和层析纯化获得目的蛋白,并将之作为抗原制备兔源多克隆抗体.经酶联免疫吸附试验(ELISA)检测,抗体效价为1:25 600,采用Western-blotting检测分析该抗体的特异性,结果显示该多克隆抗体能够特异结合TaSnRK2.1.本试验为进一步研究TaSnRK2.1在小麦-叶锈菌互作过程中的功能奠定了基础.

关键词：小麦、TaSnRK2.1、原核表达、抗体制备、Western Blotting

所属期刊栏目：42

分类号：S512.1;Q943.2(禾谷类作物)

资助基金：国家自然科学基金项目31171472,31871548;高等学校博士学科点专项科研基金资助课题优先发展领域20111302130001;河北省应用基础研究计划重点基础研究项目12967149D

在线出版日期：2019-12-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：8-14