土壤镰刀菌种群检测的巢式PCR-DGGE方法的建立

摘要：

本试验比较了4种提取小麦-玉米轮作免耕田土壤DNA的方法,并对巢式PCR反应体系和扩增条件进行了优化,建立了适合检测土壤中镰刀菌多样性的PCR-DGGE体系.结果表明:土壤DNA的质量是影响PCR扩增结果的关键因子,试剂盒Fast DNA SPIN for Soil 所提土壤DNA片段接近23 bp,A260 /A280比值为1.84,DNA产量为18.1 μg/g,更适合进行PCR反应.DNA模板的浓度决定PCR扩增结果,第一轮PCR扩增的DNA模板适宜量为2～5 ng,以第一轮PCR产物的原液为模板进行第二轮PCR扩增,在退火温度为67 ℃时扩增结果最好.PCR产物在变性范围为45%～60%的丙烯酰胺梯度凝胶中电泳7～8 h,其条带能够完全分离,可以用作土壤中镰刀菌多样性的检测.

关键词：土壤微生物、镰刀菌、PCR-DGGE、优化

所属期刊栏目：33

分类号：S431.9(病虫害及其防治)

资助基金：国家粮食丰产科技工程2006BAD02A16;河北省科技攻关项目07220301D

在线出版日期：2010-09-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：89-93