枣cDNA-AFLP技术体系建立与优化

摘要：

建立了枣(Ziziphus jujuba Mill.)cDNA-AFLP分析的优化体系和反应程序.提取获得的总RNA以人工合成的Oligo(dT)18为引物,利用鼠源反转录酶(M-MLV RT)合成cDNA第1链,合成双链cDNA后用限制性内切酶EcoR Ⅰ(识别6个碱基位点)与Mse Ⅰ(识别4个碱基位点)酶切,酶切连接后,使用与接头序列互补的预扩引物对cDNA片段池进行PCR扩增,扩增后的cDNA池定量至1 ng/μL,作为选择性扩增的模板,优化得到的选扩反应体系为:20 μL的反应体系中含5 μL模板,2 μL 10×PCR buffer,2μL MgCl2(25 mmol/L),EcoRⅠ特异性引物(50 ng/μL)1 μL,MseⅠ特异性引物(50 ng/μL)1 μL,10 mmol/L dNTP 0.4μL,5U Taq DNA Polymerase 0.12μL.选扩程序:94 ℃预变性2 min;94 ℃变性30 s,65 ℃退火30 s(每个循环降0.7 ℃),72 ℃延伸1 min,13个循环;94 ℃变性30 s,56 ℃退火30 s,72 ℃延伸1 min,31个循环;72 ℃ 7 min.

关键词：枣、cDNA-AFLP、优化

所属期刊栏目：33

分类号：S665.1(果树园艺)

资助基金：河北自然科学基金项目C2009000534、08D020、C2005000267;国家科技支撑计划2008BAD92B03、2007BAD36B07、2006BAD18B02

在线出版日期：2010-09-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：46-51