小麦TaTLP8的抗体制备及其蛋白水平表达分析

摘要：

为探究TaTLP8 类甜蛋白在小麦抵御叶锈菌侵染过程中的功能,以小麦近等基因系TcLr26 及其轮回亲本Thatcher(Tc)为材料,分别与叶锈菌生理小种260 组成不亲和与亲和组合.经生物信息学分析、原核表达、亲和层析、动物免疫,制备了TaTLP8 的兔源多克隆抗体,并使用制备的抗体,对小麦与叶锈菌互作的不亲和与亲和组合中TaTLP8 的表达情况进行了分析.结果表明,小麦TaTLP8 与大麦HvTLP8 同源性较高且N-端含有信号肽.以无信号肽区段的TaTLP8 基因(TaTLP8-nosp)构建重组质粒pET28a-TaTLP8-nosp,并以0.100 mmol/L的最适浓度IPTG对该蛋白在大肠杆菌BL21 中进行诱导表达.以纯化后的TaTLP8-nosp重组蛋白免疫新西兰兔制备了抗体.Western Blot-ting检测发现,该抗体可与小麦中TaTLP8 蛋白特异性结合.使用制备的抗体检测了小麦-叶锈菌不同亲和性组合中TaTLP8 的表达水平,发现TaTLP8 在不亲和组合中自接种叶锈菌8h后启动表达,其表达量逐渐升高;在亲和组合中,直至叶锈菌接种后48h才检测到TaTLP8 的蛋白信号,并且其表达水平逐渐下降.总体而言,TaTLP8 在不亲和组合中的表达水平高于亲和组合,说明TaTLP8 在小麦抵御叶锈菌侵染的过程中可能发挥正调控作用.

关键词：小麦、叶锈菌、TaTLP8、抗体制备、Western Blotting

所属期刊栏目：38

分类号：S512.03;Q78(禾谷类作物)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;高等学校博士学科点专项科研基金资助课题;创新能力提升计划外专引才引智专项——河北省引进国外智力项目

在线出版日期：2023-07-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：35-41