羊口疮病毒ORFV113蛋白的转录动力学、真核表达及亚细胞定位

摘要：

旨在对羊口疮病毒(ORFV)ORFV113蛋白进行转录动力学分析、真核表达及亚细胞定位研究.使用DNAS-tar软件对ORFV-JS株ORFV113基因进行序列比对分析;在阿糖胞苷(Arac)存在(Arac+)或不存在(Arac-)的情况下,于ORFV感染Hela细胞后多个时间点(2,4,6,12,24 h)收获细胞,提取细胞总RNA,逆转录PCR(RT-PCR)扩增ORFV113基因,确定ORFV113的动态转录水平;以ORFV-JS株基因组为模板,PCR扩增ORFV113基因,将其亚克隆到真核表达载体pEGFP-N1中,构建pEGFP-ORFV113重组质粒,经酶切、测序鉴定正确后,使用脂质体Lipofectamine 3000瞬时转染pEGFP-N1质粒和pEGFP-ORFV113重组质粒至HEK293细胞,通过Western Blotting鉴定ORFV113-EG-FP融合蛋白的表达;将pEGFP-N1质粒和pEGFP-ORFV113重组质粒瞬时转染Hela细胞,24 h后使用Hoechst 33342对细胞核染色,倒置荧光显微镜下观察ORFV113蛋白的亚细胞定位.结果表明,ORFV-JS株ORFV113基因全长627 bp,在ORFV毒株中高度保守,属于ORFV早期基因;成功构建了pEGFP-ORFV113重组质粒,ORFV113-EGFP融合蛋白在HEK293细胞中成功表达,大小为60～70 ku,比预测分子量大10～20 ku,预示ORFV113蛋白发生了翻译后修饰;亚细胞定位研究表明,ORFV113蛋白主要定位在Hela细胞的胞质中.综上,本研究成功地对ORFV113蛋白进行了转录动力学分析、真核表达及亚细胞定位.

关键词：羊口疮病毒、ORFV113蛋白、转录动力学、真核表达、亚细胞定位

所属期刊栏目：38

分类号：S855.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：贵州省科学技术基金;贵州大学青年教师国家自然科学基金培育项目;贵州大学引进人才科研项目

在线出版日期：2023-04-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：226-231