一种新型果胶裂解酶基因在大肠杆菌中的表达及序列分析

摘要：

为了获得高酶活力的苎麻脱胶果胶裂解酶,为后续分子改造和新型苎麻生物脱胶酶制剂复配提供理论依据.将果胶裂解酶基因pel419从重组质粒pEASY-Blunt E1-pel419更换至pET28a载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达;用SDS-PAGE和Western Blot检验pel419基因的表达效果;用生物信息学软件分析Pel419理化表征和系统发育,预测其二级结构、高级结构及关键氨基酸位点.结果表明,工程菌pET28a-pel419/BL21的果胶裂解酶活力为434.4 U/mL,较pEASY-Blunt E1-pel419/BL21提高了1.7倍;Pel419含375个氨基酸,N末端前22个氨基酸为信号肽,理论pI值为6.59,有4个半胱氨酸,不稳定系数为18.20;其蛋白结构域含有典型的右手β-螺旋结构,属于Pec lyase C家族;Pel419的Ca2+结合位点为ASP151、ASP153和ASP192,定位发现3个保守位点均暴露在三维空间的表面,并处于底物结合空间口袋.大幅度提高了Pel419表达量,并获得了Pel419关键结构信息.

关键词：苎麻、果胶裂解酶、生物脱胶、原核表达、生物信息学

所属期刊栏目：38

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：麻类所岳麓青年人才培养计划项目;中央级公益性科研院所基本科研业务费专项;国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家创新工程;现代农业产业技术体系

在线出版日期：2023-04-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：196-201