利用同源重组构建BMP6、BMPR1B真核表达载体及共转染成纤维细胞表达的研究

摘要：

旨在构建敖汉细毛羊BMP6、BMPR1B基因的过表达载体,而后将其导入成纤维细胞,分析转染后两基因mRNA、蛋白表达量的变化及基因间相互作用对毛囊的影响.选择40日龄敖汉细毛羊胎羊,采集组织样品,提取RNA后反转录成cDNA,通过PCR反应后利用SoSo试剂盒将纯化的目的片段与表达载体pcDNA3.1连接.酶切鉴定正确后,转至大肠杆菌DH5α感受态细胞,振荡培养并挑取单菌落扩大培养.提取质粒后将pcDNA3.1-BMP6、pcDNA3.1-BMPR1B单、共转染至成纤维细胞中.转染后测定表达量的变化并探究两基因间的作用关系.结果 表明,共转染成纤维细胞后BMPR1B基因及BMPR1B蛋白的表达量均较单转染组极显著升高(P＜0.01),而BMP6基因及BMP6蛋白的表达量与单转染组无显著差异(P＞0.05).因此,BMP6基因促进了BMPR1B基因的表达,BMPR1B基因对BMP6基因的表达几乎没影响.

关键词：敖汉细毛羊、同源重组技术、成纤维细胞、RT-PCR、Western Blot

所属期刊栏目：35

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家绒毛用羊产业技术体系项目;山东省农业良种工程

在线出版日期：2021-04-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：195-201