利用CRISPR/Cas9技术编辑DTH8基因改良水稻99-25的抽穗期

摘要：

CRISPR/Cas9基因编辑技术已经成为水稻育种的重要手段.为培育早熟、丰产、优质的种质资源,以农艺性状优良、迟熟粳稻品种香糯99-25为试验材料,构建了CRISPR/Cas9双靶点表达载体对抽穗期基因DTH8进行编辑,采用农杆菌介导法将构建好的表达载体转化农杆菌EHA105.用携带重组质粒的农杆菌菌液侵染水稻愈伤组织,成功获得了30株T0转基因苗.对T0植株利用潮霉素特异引物进行分子检测,其中阳性植株29株,阳性率高达96.7％.设计特异性引物对29株阳性苗的靶位点上下游600 bp进行PCR扩增测序,结果表明,7株转基因阳性苗在第2个靶点附近发生了碱基替换或插入突变.对这7株突变株系的抽穗期进行调查,发现DTH8-2、DTH8-5、DTH8-9、DTH8-10、DTH8-17、DTH8-21的抽穗期提前.利用实时荧光定量PCR检测发现DTH8-2、DTH8-9、DTH8-17与香糯99-25相比DTH8基因表达显著降低.成功利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对香糯99-25的DTH8基因进行了编辑,获得了抽穗期提前的DTH8突变体材料,为培育早熟、丰产、优质的水稻品种提供了种质资源.

关键词：水稻、抽穗期、基因编辑、DTH8、CRSPR/Cas9

所属期刊栏目：35

分类号：S511.03;Q78(禾谷类作物)

资助基金：国家转基因重大专项;山东省农业良种工程;山东省农业科学院创新工程;山东省自然科学基金;山东省现代农业产业技术体系水稻项目

在线出版日期：2021-04-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：58-66