拟南芥LBD15互作蛋白的筛选和鉴定
为了进一步挖掘拟南芥LBD逆境胁迫响应基因在植物非生物逆境胁迫应答中的作用,探究拟南芥逆境胁迫响应机理,将前期筛选到的LBD15基因构建到pGBKT7酵母表达载体上,筛选与LBD15互作的蛋白.利用酵母双杂交技术筛选了拟南芥全长均一化的酵母文库,在本次筛库试验中,146个样有107个测出序列,通过NCBI Blast分析,其中有96个获得了基因号,占总数的87.9％.根据基因号进行分类,得到了48个蛋白,在筛选到的48个蛋白中有59％的蛋白都是有重复的.然后把基因号通过网站TAIR(www.arabidopsis.org/index.jsp)查找其蛋白序列,通过亚细胞定位预测网站(http://cello.life.nctu.edu.tw/)分析其亚细胞定位,定位分析结果表明,这些蛋白主要定位于叶绿体、细胞质和细胞核.利用Blast2GO进行Gene Ontology注释显示互作蛋白共参与了14个生物过程,包括细胞过程、代谢过程、刺激响应、生物过程的调控、单组织和多组织过程及发育进程调控等.对得到的可能互作蛋白随机挑选了5个进行了互作蛋白的分离和回复验证,结果发现,AP19蛋白及其他一些蛋白的菌落能够在营养缺陷型的平板上正常生长,进一步证实了其为互作蛋白.酵母双杂交文库的成功筛选为进一步研究拟南芥LBD15的分子作用机制奠定了基础.
拟南芥、LBD15、酵母双杂交系统、蛋白互作
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S54.03(饲料作物、牧草)
国家自然科学基金项目31400244,31460526,31760582;云南省自然科学基金项目2017FB050
2019-12-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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