猪圆环病毒2型SYBRGreen Real-time qPCR检测方法的建立

摘要：

为了建立一种基于SYBRGreen的猪圆环病毒2型(PCV2)荧光定量PCR诊断方法,以PCV2 ORF2基因序列为研究对象,构建pMD19T-ORF2重组质粒作为阳性标准品,设计特异性引物,对该方法的最适引物浓度、退火进行了优化,并对该方法的灵敏度、特异性、可重复性以及临床样品检出率进行了评价.结果表明,该方法引物的最佳终浓度为0.2 mol/L,最适退火温度为55℃;检测限可达到3.0×102个拷贝/mL,而普通PCR检测限在3.0×104个拷贝/mL;溶解曲线分析显示,在77～79℃有单一的溶解峰出现,并与CSFV、PPV、PRRSV、PRV没有交叉反应;组内重复性变异系数为0.29％ ～0.32％,组间变异系数为0.32％ ～0.36％;此外,该方法对临床样品的检出率为81.5％(31/38),而常规PCR为68.4％(26/38).因此,相比常规PCR,该方法更为快速、灵敏、特异、稳定,更适合PCV2临床样品的检测,可为该PCV2早期感染的快速检测提供新方法.

关键词：猪圆环病毒2型、PCV2、ORF2、SYBRGreenReal-timeqPCR

所属期刊栏目：33

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划项目2016YFD0500704;河南省重点研发与推广专项182102110087

在线出版日期：2018-11-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：98-103