慢病毒介导稳定表达FABP4的小尾寒羊成纤维细胞系的构建
构建1株能够稳定表达FABP4的小尾寒羊成纤维细胞系,用于小尾寒羊未来的品种保护、开发与利用,首先利用组织块培养法制备了小尾寒羊原代成纤维细胞,然后利用全基因合成法克隆了绵羊 FABP4基因,并构建了过表达FABP4的慢病毒载体.经过包装后,使用获得的慢病毒感染小尾寒羊原代成纤维细胞,并通过嘌呤霉素筛选稳定转染细胞,最后应用Western Blot鉴定FABP4蛋白的过表达水平.结果表明,经过传代2 ~3次后,得到纯度较高的小尾寒羊原代成纤维细胞.滴度测定表明,当在96孔板中添加病毒原液量为10 -4μL时,观测不到荧光.当添加量为10 -3μL,能够观测到荧光,说明获得慢病毒的滴度为1 ×106TU/mL以上.利用制备的慢病毒感染小尾寒羊原代成纤维细胞,并经过嘌呤霉素筛选后,在荧光显微镜下所有细胞均能观察到绿色荧光.应用Western Blot分析发现,在对照组几乎检测不到 FABP4蛋白的表达,而在病毒感染组则能够清晰的观察到FABP4蛋白的表达,说明成功制备了稳定表达FABP4的小尾寒羊成纤维细胞系.
FABP4基因、慢病毒、小尾寒羊、原代成纤维细胞
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S826;Q78(家畜)
转基因生物新品种培育子课题2014ZX08008003-007;河南省科技攻关计划项目162102110035;河南省农业科学院优秀青年科技基金项目2016YQ18
2018-04-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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