菠菜SoGSNOR基因的克隆及原核表达
亚硝基谷胱甘肽还原酶(S-nitrosoglutathione reductase,GSNOR)在生物体中调控信号分子一氧化氮(NO)的代谢和平衡.为了深入研究GSNOR的功能,利用RT-PCR和RACE(Rapid-amplification of cDNA ends)技术从菠菜根中克隆了SoGSNOR基因的全长序列,该基因编码框1140 bp,编码379个氨基酸,GenBank登录号为KR381778.将其克隆到原核表达载体pET32a上,构建原核表达载体pET32a-SoGSNOR,并转化大肠杆菌BL21 star(DE3),通过IPTG诱导重组SoGSNOR在大肠杆菌BL21 star(DE3)中高效表达,表达的融合蛋白分子质量约为65 ku,且在上清液和包涵体中均有表达,可溶性部分经Ni2+NTA亲和柱纯化,获得纯化蛋白,并注射昆明小鼠,制备多克隆抗体,并对其进行了Western Blot检测,结果表明,稀释10000倍的抗血清能够检测到与预期SoGSNOR大小一致的目的条带.试验结果为进一步研究菠菜SoGSNOR基因功能奠定了基础.
S-亚硝基谷胱甘肽还原酶、原核表达、菠菜
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Q78;S636.03(基因工程（遗传工程）)
国家自然科学基金项目31101557,31460526
2018-04-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
80-85
