利用RNAi研究棉花SSH文库上调表达EST的功能
为了进一步研究棉花体细胞胚胎发生的分子机制,采用RNAi技术,利用棉花生物学国家重点实验室在表达载体pBI121的基础上成功改造的双元表达载体pCRI1210,构建了针对棉花胚性愈伤组织抑制性消减文库中上调表达的4个ESTs干涉载体pCRI210-EST(EST-418、EST-447、EST-496和EST-653).以从中棉所24中筛选出的体细胞胚胎分化率较高的株系W10的无菌苗下胚轴切段为受体,利用农杆菌介导法转化pCRI1210-EST干涉载体,浸染后的下胚轴切段在愈伤组织诱导培养基上进行分化.利用半定量RT-PCR技术检测愈伤组织的cDNA.结果表明,转化4个ESTs干涉载体后的胚性愈伤组织中均检测到了载体骨架,证明干涉载体均成功整合进了基因组DNA中,而4个ESTs对应的cDNA的表达量均出现不同程度的下调,不同干涉载体转化的下胚轴出愈率呈现上升和下降2种结果.其中转化EST-418干涉载体的下胚轴出愈率与对照相比有所提高,转化EST-447、EST-496和EST-653干涉载体的下胚轴出愈率与对照相比出现不同程度的下降.因此推断,4个ESTs在愈伤组织分化过程中发挥着不同的作用.其中,EST-418在棉花体细胞胚胎发生过程中起抑制作用,而EST-447、EST-496和EST-653国外品种中在棉花体细胞胚胎发生过程中起促进作用,其结果为分离棉花体细胞胚胎发生相关基因提供了技术和理论支撑.
RNAi、SSH、EST、愈伤组织
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Q78;S562.03(基因工程（遗传工程）)
国家转基因生物新品种选育重大专项子课题2018ZX08005001-008;国家棉花产业技术体系冀南综合试验站CARS-18-28;短季棉种质资源与育种技术创新16226307D
2018-04-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共9页
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