BVDV SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法与RT-PCR方法的建立与应用

摘要：

利用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法和RT-PCR方法建立2种有效地实验室检测牛病毒性腹泻病毒的方法.根据GenBank中登录的牛病毒性腹泻病毒基因序列,选取14株BVDVⅠ型和7株BVDVⅡ型,经序列比对后,设计合成1对特异性引物,建立了检测BVDV的RT-PCR方法和SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法.通过对RT-PCR方法和SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的特异性、灵敏性和重复性进行检测.结果显示,该方法可从BVDV标准毒株Oregon C24V中扩增出250 bp的特异性片段,对牛细小病毒、牛副流感病毒、牛腺病毒、呼肠孤病毒的扩增结果均为阴性,对BVDV C24V株、GSTZ株、Av69株、S183株和BVDVⅡ型扩增结果为阳性.经对标准毒株的细胞毒进行检测,RT-PCR的灵敏性为10 -1TCID50/mL,SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法的灵敏性为3.4×102copies/μL.应用2种方法对临床血清样本进行检测,结果比病毒分离方法更为敏感,操作简便.表明建立的RT-PCR方法和SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法具有特异、灵敏、高效、快速的特点,可用于BVDV的流行病学监测、实验室检测以及诊断.

关键词：牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、RT-PCR、SYBRGreenⅠ荧光定量PCR、应用

所属期刊栏目：32

分类号：S432.4(病虫害及其防治)

资助基金：企业横向项目XBMu-2015-Bc-11

在线出版日期：2018-03-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：49-53